农业部关于印发《2017年动物源细菌耐药性监测计划》的通知

文件名称:农业部关于印发《2017年动物源细菌耐药性监测计划》的通知

文件编号:农医发[2017]4号

发布时间:2017-02-14

实施时间:2017-02-14

二、动物源沙门氏菌的分离与鉴定

1范围

本方法规定了用于动物源沙门氏菌分离与鉴定的方法。

本方法适用于各种动物中沙门氏菌的分离与鉴定。

2   设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下。

2.1  冰箱：2℃-4℃和-20℃。

2.2  恒温培养箱：36℃±1℃和42℃±1℃。

2.3  电子天平：感量0.1g。

2.4  显微镜：10×～100×。

2.5  生物安全柜。

2.6  恒温水浴锅：37℃～100℃。

2.7  PCR仪。

2.8  电泳仪。

2.9  电泳凝胶成像分析系统（或紫外透射仪）。

2.10 冷冻离心机。

2.11  采样管或商品化采样拭子。

2.12 小型离心管。

2.13  微量加样器：1μL～1000μL。

2.14  吸头（与微量加样器匹配）。

2.15  漩涡仪。

2.16  微波炉。

3 培养基和试剂

3.1  标准菌株：沙门氏菌CVCC 541

3.2  DNA Maker

3.3  Taq DNA 聚合酶

3.4  dNTP

3.5  琼脂糖

3.6  5×TBE缓冲液

三羟甲基氨基甲烷（Tris）       54.0g

硼酸                           27.5g

0.5M  EDTA（pH8.0）            20mL

加纯净水至                     1000mL

3.7 50×TAE buffer

三羟甲基氨基甲烷（Tris）        242g

NA2EDTA.2H2O                    37.2g

醋酸                            57.1ml

加纯净水至                      1000mL

3.8  invA基因引物

上游为5′-GTG AAA TTA TCG CCA CGT TCG GGC AA-3′

下游为5′-TCA TCG CAC CGT CAA AGG AAC C -3′ 

3.9  运送培养基。

3.11 沙门氏菌显色琼脂。

3.12 沙门氏菌阳性血清。

3.13 亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）。

3.14 四硫磺酸盐增菌液（TTB）。

3.15 核酸染料。

3.16 氯化钠。

4 沙门氏菌分离与鉴定程序

沙门氏菌分离与鉴定程序见图2。